双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么

双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么 大肠杆菌转化后长得很慢,提质粒跑电泳条带很淡我是用的一种基因缺陷性大肠杆菌做感受态,然后将连接好的质粒转入(连好的质粒里含有缺少的基因片段),涂平板以后需要24h才有菌落长出,挑 质粒转化大肠杆菌后涂平板长出的菌落出现较规则的大小两种菌落 可以继续进行质粒提取吗? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌. 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 为什么每次做转化后菌落PCR有带,但是提质粒后就P不出. 怎样鉴定大肠杆菌质粒转化后获得的菌落是否为阳性? 农杆菌转化后摇菌的问题我的农杆菌是抗羧苄和氯霉素的,转化进的质粒是抗卡那的,那么在冻融法转化后涂板时用什么抗生素呢,只用卡那还是三种都加上吗?长出单菌落后再用什么抗生素摇菌 质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上出现菌落,但阴性对照也有菌落出现,这说明什么?原因是什么 如果为接种大肠杆菌的用于对照的培养基在培养过程中长出菌落,可能原因是什么?如果对照培养基上未长出菌落,但在接种大肠杆菌的培养基上长出了其他菌落,可能原因又是什么? 转化的大肠杆菌菌落周围为什么长出好多小菌落我做的大肠杆菌转化,涂平板培养了二十几个小时,有的菌落外面有些小菌落,后来平板放在4度冰箱,几乎每个菌落周围都长出了很多的小菌落,是 我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒? 农杆菌转化后涂平板,长出了单克隆,想要活化单克隆然后抽质粒,但是怎么都长不出菌来?液体培养基还是清的培养基换了三次,应该不是培养基的问题了, 转化涂板后,如果平板上没有菌落长出或者只有极少数的菌落长出,分析其可能存在的原因? 为什么大肠杆菌经过质粒转化后铺板后生长的菌落大小不一致,而且是有规律的出现两种大小不一样的形态. 在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来 问个很菜的问题：在跑完pcr以后目的基因已经扩增了很多了,然后再切胶纯化后应该就可以用来去测序了,为什么还要进行后面的连接转化重组质粒的抽提和酶切鉴定啊,他们有什么意义?