相思子的几个问题相思子种子里的毒素保留时间多长啊,吃下一颗会这么样,有什么办法将里面的毒素提取运用在弓弩箭上,做老鼠药效果好不,老鼠吃不吃.

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相思子的几个问题
相思子种子里的毒素保留时间多长啊,吃下一颗会这么样,有什么办法将里面的毒素提取运用在弓弩箭上,做老鼠药效果好不,老鼠吃不吃.

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　　相思子毒素的毒性
　　相思子毒素是从豆科藤本植物相思子(Abrus precatorius)的种子中提取的一种剧毒性高分子蛋白毒素,其含量约占种子2.8%～3.0%.相思子毒素存在4种同族毒素(isoabrins),即abrin-a、abrin-b、abrin-c、和abrin-d,相对分子质量介于63 ku～67 ku之间,它们由不同的基因所编码,但同属于一个多基因家族；其中abrin-b、abrin-c由于其B链凝集活性低而只有较弱的细胞毒性作用；而abrin-a、abrin-d则有极强的细胞毒性,小鼠的LD50为0.04 μg/kg,成年人摄入的致死剂量为5.0 μg/kg～7.0 μg/kg,其毒性强度是蓖麻毒素(小鼠LD503.0 μg/kg)的70 多倍,已被列为潜在的重要毒素战剂和生物恐怖病原物质之一.
　　相思子毒素中毒后,通常要经数小时至数天的潜伏期才出现综合征.可表现为口腔灼烧感、吞咽困难、恶心、呕吐、血痢、腹部痉挛性疼痛、昏睡、定向障碍、惊厥、黏膜发绀、昏迷、循环衰竭、视网膜出血、血尿和少尿等症状.经静脉注射或皮下给药,临床症状与经消化道给药相似,但胃肠道症状较轻,而注射部位通常会发生严重的炎症[3].
　　相思子毒素的物理性质
　　纯化后的相思子毒素为微黄白色无定形粉末,无味,易溶于水、氯化钠和甘油溶液,不耐热.60 ℃经30 min部分失活,80 ℃经30 min则大部分失活,100 ℃经30 min毒性及抗肿瘤活性完全消失.印度安达曼岛上居民将相思子种子煮熟后作为食物食用.完整的相思子毒素经反复冰冻和融化对其毒性影响很小.在0.1 mol/L半乳糖溶液中,毒素可在冰箱中储存数月而不会失活.分离开的链要比完整毒素更不稳定[4].
　　相思子毒素的作用机理
　　在相思子毒素的A 、B链中,B链是一种对半乳糖具有特殊亲和力的凝集素,可以与细胞表面含半乳糖残基的受体结合.进入细胞后,A链具有N糖苷酶活性,可以专一水解核糖体28S第4 324位腺苷酸的N-C糖苷键而使核糖体失活,进而影响蛋白质的合成[6].相思子毒素的吸收途径类似蓖麻毒素,即通过B连接在细胞表面含有半乳糖末端的糖蛋白和脂蛋白上进入细胞,每个细胞可以结合近100个相思子毒素分子.
　　相思子毒素对真核细胞的作用包括：①B链结合于细胞膜上的受体；②完整相思子毒素或片段跨膜转运进入胞质；③通过A链催化失活核糖体,抑制蛋白质的合成.无论通过何种途径入胞,相思子毒素进入细胞内可能定位于由单位膜形成的小泡和管状结构内.毒素内化后具有逆行转运的特点,即通过膜泡将毒素运输到高尔基堆,形成分泌囊泡进一步转运到内质网,其中有极少量的毒素到达胞质.A链被运至核糖体后,发挥其N糖苷酶的作用,可催化真核细胞核糖体60 S大亚基的28 S rRNA的第4 324位脱腺嘌呤,使之不与延长因子-2结合,从而抑制蛋白质合成过程中多肽链的移位,最终因蛋白质合成障碍导致细胞死亡[7-8].相思子毒素对细菌核糖体无效,植物细胞的核糖体比动物细胞的核糖体对相思子毒素的敏感性弱.
　　相思子毒素的基因克隆
　　20世纪90年代以来,国外先后报道有关相思子毒素基因克隆方面的研究.Narayanan S等[9]根据abrin-a的A 链氨基酸序列设计引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到2个不同的A链基因的克隆pGA7.3和Pga7.2,两个克隆的A链基因都含有753个碱基,碱基有68处不同,编码的氨基酸有38处不同,但在体外无细胞系统测定重组A链活性的试验中,两种A 链表达产物都能抑制麦胚提取物中蛋白质的合成.虽然当时还不清楚pGA7.3和Pga7.2 是什么关系,但通过这一试验证明,相思子毒素基因同蓖麻毒素基因一样,不含有内含子.几乎同时,Goto L S等[10]根据对abrin-c型N端和内部氨基酸序列的分析结果设计引物,也以基因组DNA为模板进行PCR扩增得到570 bp片段,以(α- 32p)dCTP标记该片段作为探针从基因组DNA文库中钓取到相思子毒素前体(preproabrin)基因,通过对相思子毒素前体基因及基因表达产物相思子毒素前体蛋白的分析表明,相思子毒素前体蛋白和已报道的abrin-c型蛋白的氨基酸同源性为83%；并且,同蓖麻毒素前体蛋白一样,前体相思子毒素蛋白也由4部分组成,即34个氨基酸的前导信号序列、251个氨基酸的A链、263个氨基酸的B链以及连接A、B链的14个氨基酸的连接肽.在信号肽的上游存在两个启动子以及一个血凝素共有序列5′-CATCAG-3′,在基因的下游还有两个polyA的转录终止信号.他们还在E.coli中表达了A链基因,而且当把纯化的A链蛋白加到兔网织红细胞裂解液中,在电泳图片上可以明显地观察到28S rRNA被脱去腺嘌呤而释放一段大小为400 pb 左右的片段.Hung V等[11]从相思子幼苗中提取mRNA,利用RT-PCR技术,克隆了3种不同的相思子毒素基因Pcndaac-1、Pcdnaac-5、Pcdnabc-8.通过核苷酸序列分析,他们得出结论,Pcndaac-1属于abrin-a,Pcdnabc-8属于abrin-d,Pcdnaac-5属于abrin-b.Hung V等克隆了abrin-a的A链基因,并在E.coli得到表达；体外活性试验结果表明,A链表达产物可抑制蛋白质的合成.Silva A L等[3]将A链基因片段插入Pgex-5X中,在E.coli得到表达,得到一种异源二聚体蛋白,分子质量约为60 ku,经动物实验表明,该蛋白的活性与天然的毒素蛋白相近.
　　相思子毒素的应用
　　相思子毒素在医学临床上的应用
　　早在20 世纪70年代就发现了核糖体失活蛋白(RIP)有抗肿瘤活性,Lin J等[12]接种Ehrlich腹水癌细胞后,注射相思子毒素,由小鼠体重变化及观察癌细胞总数,证实单一剂量的(0.02 mg/kg)的相思子毒素可以完全抑制腹水癌的生长.Lin J等[12]用相思子毒素处理肿瘤细胞,可有效抑制其在裸鼠体内的转移.目前,Ⅱ型核糖体失活蛋白如相思子毒素、蓖麻毒素和槲寄生毒素(viscotoxin)等一直被用来制备抗肿瘤的弹头毒素.研究表明,相思子毒素对人的白血病、黑色素瘤细胞、Lewis肺癌淋巴瘤细胞以及小鼠的艾氏腹水瘤细胞等的杀伤作用明显高于蓖麻毒素.特别是与蓖麻毒素构成的免疫毒素相比,用相思子毒素构建的免疫毒素具有更长的血清半衰期和更强的抗肿瘤活性[13].因此,以相思子毒素构成的免疫毒素备受重视.尽管由全毒素分子构成的免疫毒素对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,但由于B链糖结合部位的存在,导致了免疫毒素非特异杀伤正常细胞,限制了临床应用.目前,普遍采用相思子毒素的A 链和导向分子如特异性抗体相连来构建免疫毒素,虽然由于没有B 链的帮助而导致免疫毒素的毒性降低,但替代B 链的导向分子提高了免疫毒素的特异性杀伤作用,改善了在体内应用的安全性.国外已有文献报道用相思子毒素A 链作为免疫毒素的应用研究,Wawrzynezak I B等[14]用交联剂SPDB将针对人类小细胞肺癌(SCLC)表面抗原的mAb(SWA11)和相思子毒素的A 链偶联而成的免疫毒素对裸鼠体内的SW2实体肿瘤有明显的杀伤作用,而对正常细胞基本未产生杀伤,并且作用时间比单独注射相思子毒素A 链的作用时间延长了7 d～10 d.Tsai J M等[15]用相思子毒素的A 链和针对人结肠癌抗原(CEA)的mAb (C 27)组成免疫毒素MAAC,不论在体外还是在体内MAAC 都能特异性地杀伤人的结肠癌细胞(LS174T),而且MAAC毒性还表现出明显的选择性,对分泌癌胚抗原的人胚肾细胞的细胞毒性是不分泌该抗原的人胚肾细胞的毒性的16倍.这对于术后恶性肿瘤转移的控制及微小转移灶的治疗很有意义.近来有文献报道,口服相思子毒素对术后恶性肿瘤的转移也有抑制作用,相思子毒素抑制小鼠癌转移的最小有效剂量为1 ng/d,最佳剂量为2 ng/d～5 ng/d.随着对相思子研究的进一步深入,相思子资源将在医疗等领域得到更广范的应用[16-17].
　　相思子毒素与生态农药
　　随着人类对环境保护的重视及化学农药开发难度的加大,植物源农药的开发已成了当今农药开发的新热点.Dharkar P D等利用蓖麻籽和根叶的蓖麻毒素成分作为杀虫剂,应用于农作物的杀虫,取得了一定的效果.印度利用淘米水和蓖麻籽的熬出物防治椰子害虫二瘤犀甲,效果显著.Ohba H等用不同溶剂提取的蓖麻粗提物对天幕毛虫、桃蚜及小菜蛾进行杀虫剂试验,结果表明,毒蛋白对害虫具有触杀作用.由于昆虫核糖体RNA有对N-糖苷酶敏感的共有序列,蓖麻毒素能抑制昆虫的蛋白质合成,而植物自身能免受毒害,因此,利用相思子毒素、蓖麻毒素开发出生物农药是有前途的.